GANESH

GaNesh – EC2CO (2016-2017): Étude fonctionnelle des Gènes impliqués dans les ANomalies Embryo-larvaires chez l'Huître creuse Crassostrea gigas dans le cadre d’une exposition à des pesticides

L’objectif principal de cette étude est d’identifier les mécanismes moléculaires conduisant aux anomalies de développement observées chez l’huître à l'aide du test embryo-larvaire lors de l’exposition à des pesticides. Le but à long terme est de développer des marqueurs moléculaires précoces d’embryo-toxicité. Pour répondre à cet objectif, l’étude se déroule en 3 étapes. Dans un premier temps sont analysés les modulations de l'expression des gènes cibles impliqués dans l’embryogenèse, la formation de la coquille et la méthylation de l’ADN suite à une exposition à des pesticides (cuivre, diuron). Les profils d’expression de ces différents gènes sont examinés par RT-qPCR. Par ailleurs, les effets néfastes des pesticides sur l’embryon d’huître sont évalués en terme (i) d’embryotoxicité via l’observation des anomalies de développement au stade de larve D et (ii) de génotoxicité via le test des Comètes. Deuxièmement, les gènes candidats différentiellement exprimés présentant les plus fortes modulations de leurs transcrits sont utilisés pour l’étude des altérations épigénétiques gène spécifiques.D’une part, la méthylation globale de l’ADN est mesurée par HPLC chez les embryons au stade gastrula. D’autre part, la méthylation spécifique des gènes cibles est évaluée par immuno-précipitation de chromatine suivie de qPCR (MeDIP-qPCR). In fine les gènes présentant une altération des marques épigénétiques ainsi qu’une expression perturbée seront utilisés dans l’étape de validation fonctionnelle avec l’outil CRISPR/Cas9. Le développement de cette méthodologie innovante et prometteuse, inédite chez les bivalves, a pour but de muter un gène par édition ciblée du génome et ainsi d’inactiver son expression. L’observation des conséquences phénotypiques associées permettra ainsi de valider des cibles moléculaires d’embryotoxicité des pesticides (cuivre, diuron).